Химически състав от неръждаема стомана 347 Големината на венозна или капилярна кръв, специфична за SARS-CoV-2, Т-клетъчни отговори определя имунитета към COVID-19.

Благодарим ви, че посетихте Nature.com.Използвате версия на браузър с ограничена поддръжка на CSS.За най-добро изживяване ви препоръчваме да използвате актуализиран браузър (или да деактивирате режима на съвместимост в Internet Explorer).Освен това, за да осигурим постоянна поддръжка, показваме сайта без стилове и JavaScript.
Плъзгачи, показващи три статии на слайд.Използвайте бутоните за връщане назад и напред, за да се движите през слайдовете, или бутоните за управление на плъзгачите в края, за да се движите през всеки слайд.

347 химичен състав от неръждаема стомана

Химически състав на серпентина от неръждаема стомана 347

Химическият състав и механичните свойства на серпентината от неръждаема стомана 347 са както следва:
- Въглерод – 0,030% макс
- Хром – 17-19%
- Никел – 8-10,5%
- Манган – 1% макс

Механични свойства на серпентина от неръждаема стомана 347

Според производителя на намотка от неръждаема стомана 347, механичните свойства на 347 намотка:
- Якост на опън (psi) – 75 000 мин
- Граница на провлачване (psi) – 30 000 мин
- Удължение (% в 2″) – 25% мин
- Твърдост по Бринел (BHN) – 170 макс

Приложения и употреби на серпентина от неръждаема стомана 347

• Серпентина от неръждаема стомана 347, използвана в захарните мелници.
• Серпентина от неръждаема стомана 347, използвана в торове.
• Намотка от неръждаема стомана 347, използвана в промишлеността.
• Серпентина от неръждаема стомана 347, използвана в електроцентрали.
• Серпентина от неръждаема стомана 347, използвана в храните и млечните продукти.
• Намотка от неръждаема стомана 347, използвана в заводи за нефт и газ.
• Производител на намотки от неръждаема стомана 347, използвани в корабостроителната индустрия.

Смята се, че специфичните за SARS-CoV-2 Т клетки предпазват от инфекция и прогресия на COVID-19, но няма преки доказателства за това.Тук сравнихме измервания на цяла кръв на SARS-CoV-2-специфични интерферон-γ положителни Т-клетки с положителни резултати от диагностичен тест за COVID-19 (PCR и/или страничен поток) в рамките на 6 месеца след вземането на кръвта на Lian.Сред 148 участници, дарили проби от венозна кръв, степента на SARS-CoV-2-специфичния Т-клетъчен отговор е значително по-висока при тези, които са останали защитени, отколкото при тези, които са били заразени (P <0,0001).% риск от инфекция, докато високата интензивност намалява този риск до 5,4%.Тези резултати бяха обобщени за допълнителни 299 участници, които тестваха мащабируем анализ на капилярна кръв, който може да улесни достъпа до данни за Т-клетъчния имунитет в популационен мащаб (14,9% срещу 4,4%).По този начин измерването на Т-клетки, специфични за SARS-CoV-2, може да предвиди риска от инфекция и трябва да бъде оценено при наблюдение на индивидуалния и популационния имунен статус.
Измерването и разбирането на имунния отговор на инфекцията със SARS-CoV-2 е важно за разработването на ефективни бъдещи стратегии за минимизиране на общественото здраве и икономическите въздействия от бъдещи огнища на COVID-19.Идентифицирането на имунни корелати ще предостави важна информация за податливостта на населението към вирусна инфекция, евентуално ранно предупреждение за пикови хоспитализации и също така ще позволи на хората лично да управляват своя риск от инфекция и риска от заразяване на други.Имунното наблюдение се оказа критично за оценка на ефективността на ваксините срещу COVID-19 при здрави и високорискови пациенти1,2,3, особено при мутанти на SARS-CoV-24, а откриването на имунокомпрометирани ще означава необходимост от повишаване на имунитета Ваксинирайте се и предотвратявайте бъдещи огнища.
Нивото на имунитет на индивида към инфекция със SARS-CoV-2 зависи от множество фактори: вирусен товар по време на експозиция, варианти на вируса, възраст, предишен статус на ваксинация/инфекция, съпътстващи заболявания, лекарства и най-важното, анти-SARS-CoV инфекция .2 адаптивен имунен отговор възниква в момента на излагане на вируса5.Оценката на имунния отговор при инфекция и/или ваксинация със SARS-CoV-2 се фокусира върху серологични анализи, които измерват наличието на антитела, специфични за структурен протеин (напр. пиков гликопротеин).Въпреки това, наличието или отсъствието на антитела само по себе си не определя точно защитен имунен отговор, тъй като отговорите са значително отслабени с течение на времето6 и неутрализиране на вариантите на SARS-CoV-2 при възстановяващи се или двойно ваксинирани индивиди Слаба активност, която може да доведе до голям брой пробивни инфекции7.Наистина, защитата срещу симптоматичен COVID-19, причинен от варианта Omicron (B.1.1.529), намаля до около 10% само след 4–6 месеца иРНК ваксинация, въпреки че защитата срещу тежко заболяване продължи >68% за най-малко 7 месеца8.Измерването на отговорите на Т-клетките на адаптивната памет, които предоставят дългосрочна защита срещу вирусна инфекция, е най-добрият показател за чувствителност към инфекция със SARS-CoV-2 и следователно по-добра индикация за риска от положителен тест за COVID-199, тъй като специфичните T клетките могат да предотвратят инфекция.без сероконверсия10,11.Въпреки това, измерването на Т-клетъчните отговори е получило по-малко внимание поради методологични трудности и логистични проблеми при получаване и транспортиране на проби от венозна кръв, особено при провеждане на големи наблюдателни проучвания за оценка на ефикасността на ваксината и наблюдение на имунитета.Ваксинираните индивиди обаче показват силна Т-клетъчна активност срещу варианти на SARS-CoV-2, което потенциално компенсира загубата на реактивност на антитялото, за да ограничи тежестта на COVID-1912,13.
Тук се опитахме да разберем дали едно измерване на Т-клетъчния отговор на SARS-CoV-2 може да предскаже абсолютния риск от инфекция със SARS-CoV-2 в рамките на 6 месеца след вземането на кръвна проба, независимо от предишни фактори, повлияващи имунната система.За да направим Т-клетъчния тест с висока пропускателна способност и приложим за по-големи проучвания, ние също се опитахме да направим теста миниатюризиран, така че да може да се извърши с помощта на капилярна кръвна проба от пръст.
Измерихме клетъчните и хуморалните имунни отговори при здрави донори, използвайки комбинирано откриване на SARS-CoV-2 Т клетки и IgG антитела на базата на цяла венозна кръв (за характеристиките на участниците вижте март 2022 г. 14. При ваксинирани донори SARS-CoV-2- специфичните Т-клетъчни отговори бяха определени чрез измерване на плазмените нива на интерферон-γ (IFN-γ) след стимулация на цяла кръв с пептид SARS-CoV-2 (както по-рано, реф. 14,15,16,17,18) и IgG отговорите, свързани с нуклеокапсид (N) са били повишени при тези, които са съобщили за предишна инфекция, въпреки че и двата отговора са били по-високи при предишни инфектирани неваксинирани донори, максимални в тялото (Фиг. 1a, b). са били най-високи при предишни заразени ваксинирани донори (Фигура 1c–e).
SARS-CoV-2-специфични IFN-γ+ Т клетъчни отговори бяха измерени чрез анализ на цяла венозна кръв и въз основа на ваксинациите на участниците и предишен статус на инфекция със SARS-CoV-2 (потвърдено чрез PCR и/или тест за латерален поток)' Vac + /Inf +' n = 60 (зелено), 'Vac + /Inf-' n = 82 (синьо), 'Vac-/Inf +' n = 4 (жълто), 'Vac-/Inf-' n = 1 (не се прилага).Реакциите на специфично за SARS-CoV-2 IgG свързване са насочени към нуклеокапсид („N“) (b; ****P < 0,0001, **P = 0,0016), добавен рецептор-свързващ домен („RBD“) (c; ** P = 0,0022, *P < 0,015), шипова субединица 1 („S1“) (d; ***P = 0,0005, *(Vac + /Inf+ спрямо Vac + /Inf-) P = 0,022, *(Vac- /Inf+ спрямо Vac+/Inf-) P = 0,012) и пиковата субединица 2 („S2“) (e) е измерена чрез тестове за цяла венозна кръв и въз основа на ваксинация на участниците и предишен SARS -CoV-2 (потвърден с PCR и/ или тест за страничен поток) инфекциозен статус.'Vac + /Inf +' n = 60 (зелено), 'Vac + /Inf-' n = 71-82 (синьо), 'Vac-/Inf +' n = 4 (жълто).Сравненията бяха направени с помощта на теста на Kruskal-Wallis, коригиран за множество сравнения с помощта на теста на Dunn.Данните се показват като диаграми (централна линия на медианата, горна граница на 75-ия персентил, долна граница на 25-ия персентил) с мустачки на минималните и максималните стойности.Всяка точка представлява донор.Суровите данни се предоставят под формата на файлове с необработени данни.
След вземане на кръвни проби, участниците бяха помолени да докладват сами положителни резултати от PCR и/или тест за страничен поток за COVID-19;ако участниците са дали положителен тест между 1 септември 2021 г. и 29 декември 2021 г., се е предполагало, че са заразени с Делта (B.1.617.2) вариант на коронавирус и Omicron (B.1.1.529) към общественото здравеопазване на Уелс след 29 декември 2021 г., когато този вариант на загриженост става доминиращ.Сред 148 подлежащи на оценка донори наблюдавахме процент на инфекция от 26,3% (39/148) в рамките на 6 месеца след кръводаряването, 38 от които получиха втора или трета доза ваксина срещу COVID-19 (пробивът на инфекцията настъпи след Pfizer/BioNTech ( BNT162b2) иРНК ваксина или ваксина на AstraZeneca (ChAdOx1 nCoV-19));заразен е и неваксиниран донор.Степента на SARS-CoV-2-специфичните IFN-γ-позитивни Т-клетъчни отговори е значително по-ниска при тези, които съобщават за положителен диагностичен тест за COVID-19, отколкото при неинфектирани донори (P <0,0001; Фиг. 2а), главно поради оптимална индукция на Т клетъчни отговори чрез ваксинация при някои участници (P = 0.050; Допълнителна фигура 1).Нямаше корелация между степента на IFN-γ+ Т клетъчния отговор и времето до положителен резултат от теста за COVID-19 (допълнителна фигура 2).Обратно, нито отговорите на RBD-, S1-, S2-свързващи IgG (Фигури 2b–d), нито отговорите на RBD-, S1-неутрализиращи антитела са специфични за див тип или делта SARS-CoV-2 (B.1.617).) (допълнителна фигура 3) може да прави разлика между хората, изложени на риск от инфекция.Въпреки това ниските N-свързани IgG отговори срещу SARS-CoV-2 корелират с риска от инфекция с COVID-19 (P = 0,0084; Фигура 2e);тези, които са дали положителен резултат, са били с 85% по-малка вероятност (P = 0,00035; ИЛИ 0,15, 95).% CI: 0,047–0,39 (допълнителна фигура 4).
Проби от венозна кръв от здрави донори (n = 148) оценяват SARS-CoV-2-специфичните IFN-γ+ Т-клетъчни отговори (a; ****P <0,0001) и свързването на Spike рецептора към специфичния SARS-CoV -2 стимула.домейн („RBD“) (b), шип 1 субединица („S1″) (c), шип 2 субединица („S2″) (d) и нуклеокапсид („N“) (e; **P = 0,0084 ) .Идентифицирани участници с положителен тест за COVID-19 (PCR и/или страничен поток);всички инфекции са възникнали в рамките на 6 месеца след вземането на кръвна проба.Сравненията бяха направени с помощта на двустранен тест на Ман-Уитни.Данните се показват като диаграми (централна линия на медианата, горна граница на 75-ия персентил, долна граница на 25-ия персентил) с мустачки на минималните и максималните стойности.Всяка точка представлява донор.ns не е важно.Топлинната карта f показва ранговите корелации на Spearman между променливите за посочения набор от данни.Сравненията, които не са статистически значими, бяха изключени от матрицата и маркирани с празни клетки.Суровите данни се предоставят под формата на файлове с необработени данни.
Предварително зададената диагностична положителна граница от 14 се счита за твърде произволна, за да се оцени рискът от повторна инфекция, така че бяха установени интерквартилни диапазони, за да се установят абсолютни рискови параметри.Статистическият модел, който включваше само променливи, които имаха значителен ефект върху резултатите, показа, че степента на SARS-CoV-2-специфичния IFN-γ+ Т клетъчен отговор е най-важният имунен биомаркер за определяне на шансовете на индивида да бъде тестван за COVID.-19 положителен (Фигура 2f и допълнителна фигура 4).Пациенти със специфичен за SARS-CoV-2 IFN-γ+ Т-клетъчен отговор в третия (194-489 pg/ml IFN-γ) и четвъртия (>489 pg/ml IFN-γ) квартил 65% (P = 0,055; ИЛИ 0,35, 95% CI: 0,11–1,00) и 90% (P = 0,0050; ИЛИ 0,098, 95% CI: 0,014–0,42) са имали повече участници.Шансовете са малки (допълнителна фигура 4).Като цяло участниците със специфичен за SARS-CoV-2 Т-клетъчен отговор от венозна кръв ≤79 pg/mL IFN-γ са имали 43,2% риск от пробивна инфекция на 6-ия месец, в сравнение с отговор >489 pg/mL.ml IFN-y има риск от инфекция от 5,4% (таблица 2).
Изследването на цяла венозна кръв е ограничено по обхват поради необходимостта от вземане на проби от флеботомист.За да се увеличи наличността на Т-клетъчно и IgG тестване за SARS-CoV-2, е разработен алтернативен метод за вземане на проби от капилярна кръв, който позволява на участниците да получават кръвни проби от пръста си у дома.Доколкото ни е известно, не е имало предишни доклади за измерване на антиген-специфична Т-клетъчна функция в проби от капилярна кръв.По-рано беше показана силна корелация между броя на лимфоцитите, получен при използване на сравними проби от капилярна и венозна кръв.Освен това се съобщава, че анализите на базата на цяла кръв, измерващи SARS-CoV-2-специфични Т-клетъчни отговори, използват само 320 μL венозна кръв,20 елиминирайки опасенията относно честотата на прогениторните Т-клетки в проби от капилярна кръв.
Използвахме този високопроизводителен стандартизиран съвместен анализ на SARS-CoV-2 Т клетки и IgG антитела на базата на капилярна цяла кръв, за да измерим клетъчния и хуморален имунен отговор при участници с различни съпътстващи заболявания и предишен статус на ваксинация/инфекция (Таблица 1).набрани от цялото Обединено кралство между 24 януари и 14 март 2022 г.14. По-голямата част (90,9%) от пръстовите проби са получени правилно и изпратени в лабораторията в рамките на 24 часа след вземането.В някои случаи проби са получени в рамките на 48 часа след вземането на кръв, но нито една от тези проби не е преминала проверките за контрол на качеството и не е повлияла на общите измервания на Т клетки или антитела (допълнителна фигура 5).Въпреки че имаше разлики в степента на SARS-CoV-2-специфичния IFN-γ+ Т клетъчен отговор, измерен в съответните проби от капилярна и венозна кръв при някои индивиди, нямаше значителни разлики като цяло (P = 0,88; Допълнителна фигура 6 ).).
SARS-CoV-2-специфичните IFN-γ+ Т клетъчни отговори са значително повишени при ваксинирани индивиди, които също съобщават за предишна инфекция (P = 0,0001), но не значително по-високи, отколкото при инфектирани преди това неваксинирани индивиди донори (P = 0,19, фиг. 3а).).Отговорите на IgG срещу пиковия гликопротеин (RBD, S1, S2) са значително по-високи при ваксинирани донори, отколкото при неваксинирани донори, независимо от предишния инфекциозен статус (Фигура 3b-d).Интересно е, че средният N-свързан IgG отговор е най-висок при предишно заразени неваксинирани участници в сравнение с ваксинирани участници, въпреки че това не е достигнало значимост (Фигура 3е).Сред неваксинираните и неинфектирани донори, които се самодекларираха, 15 от 37 (40,5%) участници бяха положителни за N-свързан IgG, над предварително установения праг от 2,0 BAU/mL14;тези 15 участници Дванадесет от тези пациенти са дали положителен тест за IFN-γ+ Т клетъчен отговор над установения преди това праг от 22,7 pg/mL IFN-γ14.Следователно е вероятно тези участници преди това да са били заразени със SARS-CoV-2 и да не са били тествани за COVID-19 поради личен избор, липса на PCR и/или оборудване за страничен поток или да са били асимптоматични.Въпреки че има значителна корелация между Т-клетъчните отговори към IFN-γ+ и нивата на N-свързан IgG при неваксинирани донори (P = 0,0044; допълнителна фигура, N-свързаният IgG отговор намалява по-бързо от N-свързания IgG отговор, докато IFN-γ + Т клетъчните отговори се поддържат независимо от ваксинационния статус, въпреки че броят на донорите 50 седмици след провокацията е нисък (допълнителна фигура 8). Типът на ваксинацията като цяло е малко по-различен в наблюдаваните IgG отговори, специфични за SARS-CoV-2, T клетки и свързани с RBD, въпреки че участниците, които са получили две дози BNT162b2, последвани от реваксинация с mRNA1273, показват значително по-високи нива на IFN-γ + Т клетките са по-чувствителни към SARS-CoV-2 от тези, които са получили две дози ChAdOx1 и BNT162b2 (допълнителна Фигура 9) В допълнение, докладваните съпътстващи заболявания имат малка обща разлика в наблюдаваните Т-клетъчни отговори в сравнение със здрави донори (допълнителна фигура 10).
SARS-CoV-2-специфични IFN-γ+ Т клетъчни отговори бяха измерени чрез капилярен анализ на цяла кръв и се основаваха на ваксинации на участниците и предишен инфекциозен статус на SARS-CoV-2 (потвърден чрез PCR и/или тест за латерален поток).'Vac + /Inf +' n = 42 (зелено), 'Vac + /Inf-' n = 158 (синьо), 'Vac-/Inf +' n = 33 (жълто), 'Vac- /Inf-' n = 37 (сив).****P < 0,0001, ***P = 0,0001, *(Vac+/Inf- спрямо Vac-/Inf-) P = 0,045, *(Vac-/Inf+ спрямо Vac- /Inf-) P = 0,014 .Реакции на специфично свързване на SARS-CoV-2 IgG към свързващия домейн на шиповия рецептор („RBD“) (b; ****P < 0,0001, ns: незначително), шипова субединица 1 („S1“) (c; * * **P <0,0001, ns: незначително), шипова субединица 2 („S2″) (d; ****P <0,0001, ***P = 0,0005, *P = 0,016) и нуклеокапсид („N“) (e; ****P < 0,0001, ns не е значимо) са измерени с помощта на анализ на цяла венозна кръв и въз основа на ваксинации на участниците и предишен SARS-CoV-2 (потвърден с PCR и/или анализ на латералния поток) Инфекциите са подразделени на състояние.'Vac + /Inf +' n = 46 (зелено), 'Vac + /Inf-' n = 182 (синьо), 'Vac-/Inf +' n = 34 (жълто), 'Vac-/Inf-' n = 37 (сив).Сравненията бяха направени с помощта на теста на Kruskal-Wallis, коригиран за множество сравнения с помощта на теста на Dunn.Данните се показват като диаграми (централна линия на медианата, горна граница на 75-ия персентил, долна граница на 25-ия персентил) с мустачки на минималните и максималните стойности.Всяка точка представлява донор.Суровите данни се предоставят под формата на файлове с необработени данни.
Както и преди, участниците бяха помолени да докладват положителни резултати от PCR и/или страничен кръвен поток за COVID-19;според Здравната агенция на Обединеното кралство се предполага, че участниците са били заразени с коронавирус Omicron (B.1.1.529) по време на тестването на положителния вариант на вируса, тъй като това беше доминиращият вариант в Обединеното кралство през периода на изследването.Сред 299 подлежащи на оценка донори наблюдавахме процент на инфекция от 8,0% (24/299) в рамките на три месеца от капилярното даряване, седем от които не бяха ваксинирани.Делът на придружаващите заболявания сред всички участници е по-нисък при тези с положителен тест за COVID-19 (10,7%), отколкото тези с отрицателен тест за COVID-19 (24,4%, таблица 1), което може да се дължи на факта, че участниците с определени заболявания са по-внимателни и предпазват от потенциални последствия като диабет и рак.Както се наблюдава в кохорта от венозна кръв, SARS-CoV-2-специфични интерферон-γ (IFN-γ)-позитивни Т-клетки, измерени в проби от капилярна кръв от лица, докладващи положителен диагностичен тест за COVID-19.Големината на отговора беше значително по-ниска, отколкото при неинфектирани донори (P = 0,034; Фигура 4а) поради относително слабата индукция на Т-клетъчен отговор чрез ваксинация и/или предишна инфекция (допълнителна фигура 11).По същия начин, нито отговорите на RBD-, S1-, S2-свързващи IgG (фигури 4b–d), нито отговорите на RBD-, S1-неутрализиращи антитела са специфични за див тип или делта SARS-CoV-2 (B. 1.617).(Допълнителна фигура 12).Могат да бъдат идентифицирани лица, изложени на значителен риск от инфекция.За разлика от венозната кохорта, N-свързаните IgG отговори също не разграничават риска от COVID-19 (Фигура 4e), което предполага, че вариантът Omicron (B.1.1.529) увеличава избягването на имунитета при инфектирани преди това индивиди, както беше описано наскоро 21. За разлика от това, силата на SARS-CoV-2-специфичния IFN-γ Т клетъчен отговор отново беше най-важната променлива при определяне на индивидуалните шансове за положителен тест за COVID-19 (Фигура 4f).Като цяло участниците със специфичен за SARS-CoV-2 капилярен Т-клетъчен отговор ≤23,7 pg/mL IFN-γ са имали 14,9% риск от инфекция след три месеца в сравнение с отговор >141,6 pg/mL.ml IFN.-γ има риск от инфекция от 4,4% (Таблица 2).
IFN-γ+ Т-клетъчни отговори, специфични за SARS-CoV-2 (a; *P = 0,034) и специфичен за SARS-CoV-2 IgG-насочен рецептор-свързващ домен („RBD“) (b), пикова субединица 1 (' S1′) (c), шипова субединица 2 („S2′) (d) и реакция на свързване на нуклеокапсид („N“) (e).Участниците, идентифицирани като положителни за тестове за COVID-19 (PCR и/или тест за страничен кръвен поток), всички инфекции са настъпили в рамките на 3 месеца след вземането на кръвна проба.Сравненията бяха направени с помощта на двустранен тест на Ман-Уитни.Данните се показват като диаграми (централна линия на медианата, горна граница на 75-ия персентил, долна граница на 25-ия персентил) с мустачки на минималните и максималните стойности.Всяка точка представлява донор.ns не е важно.Топлинната карта f показва ранговите корелации на Spearman между променливите за посочения набор от данни.Сравненията, които не са статистически значими, бяха изключени от матрицата и маркирани с празни клетки.Суровите данни се предоставят под формата на файлове с необработени данни.
Докато преминаваме към следващата фаза на пандемията от COVID-19, фокусът ще се измести от превенцията към индивидуалното управление на риска и идентифицирането на уязвимите членове на обществото.Установяването на корелати на имунитета срещу COVID-19 е от решаващо значение за ефективното идентифициране и лечение на тези високорискови групи.Сега има все повече доказателства, че Т-клетъчният имунитет предпазва от инфекция със SARS-CoV-2 и ограничава тежестта на COVID-1910.Данните, представени тук, показват, че комбинираната сила на SARS-CoV-2-специфични IFN-γ+ Т-клетъчни отговори срещу шипове, мембрани и нуклеокапсидни структурни протеини осигуряват по-голяма защита срещу COVID-19, отколкото свързването на антитяло.19 насърчава или неутрализира отговорите .и трябва да се вземе предвид при оценката на индивидуалния и/или колективния имунитет.РНК вируси като SARS-CoV-2 или вирус на грип А (IAV) избягват серологична неутрализация чрез бързо развиващи се открити В-клетъчни епитопи върху повърхностни антигени, разпознати от антитела.Защитният имунен отговор, осигурен от Т-клетките, може да отразява насочването на епитопи от по-консервирани региони на вирусни протеини, които не могат бързо да избягат от имунен отговор.Т-клетъчно медиираната защита срещу нови варианти на SARS-CoV-2 е подобна на хетеросубтипичната защита, медиирана от Т-клетъчно насочване на запазени присъщи протеини, наблюдавани в IAV22,23 подтипове.
Въпреки огромния потенциал за измерване на клетъчния имунен отговор към COVID-19, сравнително малко внимание се обръща на разработването на точни, високопроизводителни, стандартизирани Т-клетъчни анализи.Традиционните сложности и разходи, свързани с измерването на Т-клетъчните отговори, изключват точното определяне на Т-клетъчния имунитет при скрининг за голям популационен имунитет.Въпреки че наскоро станаха достъпни няколко комерсиални теста за стимулиране на пептиди в цяла кръв, в момента всеки се нуждае от флеботомист за получаване на кръв, което ограничава наличността и мащаба.Капилярните кръвни системи се използват широко за определяне на разпространението на антитела срещу SARS-CoV-2 в популация.Адаптирахме анализи на капилярна кръв, за да извършваме тестове за стимулиране на пептиди в цяла кръв, за да оценим реактивността на Т клетките към структурни протеини на SARS-CoV-2 и отговорите на специфични антитела на SARS-CoV-2.Всъщност комбинираното измерване на специфични за SARS-CoV-2 антитела и Т клетки в една и съща проба от капилярна кръв е много привлекателно: (i) намалява необходимостта от множество кръвни тестове на участник, (ii) подобрява опита и разбирането на участниците;(iii) подобряване на логистиката и намаляване на дублирането, (iv) намаляване на въздействието върху околната среда, тъй като се изискват по-малко лабораторни консумативи и доставка на проби.Въпреки че общата IFN-γ реактивност е подобна между съвпадащите проби от венозна и капилярна кръв, наблюдава се, че е по-ниска в кохортата от капилярна кръв на участниците (Фиг. 4а) в сравнение с кохортата от венозна кръв (Фиг. 2а).Стойности на IFN-γ Има няколко обяснения за това откритие, а именно голям брой участници със съпътстващи заболявания, изискващи имуносупресивна терапия, бяха включени в кохортата за вземане на проби от капилярна кръв (Таблица 1) и жизнеспособността и/или функцията на Т клетките, получени от съдови пробите може да са ниски, особено като се вземат предвид условията на дългосрочно съхранение на пробите преди пептидна стимулация.
Понастоящем широко достъпната ваксина срещу COVID-19 осигурява най-добрата защита срещу тежко заболяване за повечето реципиенти в рамките на 6 месеца след ваксинацията8.Окуражително е, че въпреки лошата индуцирана от ваксината серологична неутрализация на вариантите на SARS-CoV-26,7, Т-клетъчните отговори, предизвикани от ваксинация срещу див тип SARS-CoV-2, остават силно реактивни, тъй като се появяват 25 други.Данните, които представяме тук, демонстрират значението на по-широка оценка на имуногенността на ваксината, подчертавайки ваксини с недостатъчен Т-клетъчен имунитет за предотвратяване на внезапна инфекция и постоянно предаване на вируса.Ние също така наблюдавахме, че много неваксинирани индивиди, включени в капилярната кохорта, имат значителен отговор на SARS-CoV-2-специфични Т клетки (и N-свързващ IgG) независимо от предишна ваксинация, което вероятно се дължи на предишна инфекция.Вместо да се ваксинират подходящи индивиди, техният риск от инфекция трябва да бъде оценен въз основа на текущия им имунизационен статус и направените информирани избори.
Ограниченията на това проучване включват уверението, че участниците сами са съобщили за инфекция със SARS-CoV-2 след вземане на кръв, за да се определи значимостта на имунитета;някои участници може да имат асимптоматична инфекция и да не могат да се подложат на PCR и/или тестване на латерален поток за COVID-19.В нашия набор от данни липсваше и информация за лекарствата на участниците по време на вземането на кръвни проби.Освен това, като се има предвид, че всички наши участници съобщават само за леки/умерени симптоми или никакви симптоми, не беше възможно да се идентифицират имунни отговори от нашия набор от данни, които предвиждат повишен риск от тежко заболяване и хоспитализация за COVID-19.Въпреки това, наличието на CD8+ Т клетъчни отговори срещу нуклеокапсид-специфични епитопи наскоро беше свързано със защита срещу тежък COVID-1926.В допълнение, анализът, използван тук, не измерва отговорите на Т клетките към специфични рано експресирани SARS-CoV-2 неструктурни протеини, за които наскоро беше доказано, че се натрупват предимно в серонегативни здравни работници, които са били в контакт със заразени пациенти.Въз основа на тази работа, като се има предвид разпространението на предаване в общността по време на набирането и високата вероятност от контактна инфекция в популацията, броят на специфичните за SARS-CoV-2 Т клетки, открити в нашите тестове, също изглежда способен да бъде изчистен.субклинични инфекции в нашите кохорти.И накрая, ние не измервахме производството на интерлевкин 2 от Т-клетките, защото предишната ни работа показа лоша идентификация на SARS-CoV-214-специфични Т-клетъчни отговори, въпреки че IL-2-специфичните отговори може да показват съществуваща кръстосана реактивност.клетки, свързани със защита срещу SARS-CoV-211 инфекция.
Взети заедно, тези данни подчертават фундаменталната необходимост от дългосрочни надлъжни проучвания, които включват специфични за SARS-CoV-2 Т-клетъчни отговори в мерки за имунитет в популационен мащаб.Тези усилия могат да бъдат подпомогнати от разработването на нов капилярен кръвен тест, който измерва Т-клетъчния отговор.
Изследователският проект набира участници от февруари 2021 г. до март 2022 г. Кохортата от здрави донори (n = 148), които дариха проби от венозна кръв, се състоеше предимно от университетски персонал и студенти, участващи в услугата за скрининг за COVID-19 на университета в Кардиф, или персонал в основно училище в Кардиф.Всички участници са иначе здрави и не съобщават, че са приемали имуносупресивни лекарства (вижте таблица 1 за характеристики).Кохортата от участници, които дариха проби от капилярна кръв, включваше всички доброволни донори (на възраст 18+) от цялото Обединено кралство.Между 24 януари и 14 март 2022 г. в изследването са включени 342 участници, от които 299 са подали кръвни проби в лабораторията.Много участници остават неваксинирани и/или съобщават за сериозни съпътстващи заболявания, включително автоимунни заболявания и рак (вижте таблица 1 за характеристики).Това проучване получи етично одобрение от Комитета по етика на изследванията в Нюкасъл и Северен Тайнсайд 2 (ID IRAS: 294246) и Комитета по етика на изследванията към Медицинския факултет на Кардифския университет (SREC ref: SMREC 21/01).Всички участници са дали писмено информирано съгласие преди включването.Участниците не са получили никаква компенсация за участие в това проучване.
Проби от венозна кръв бяха получени чрез венепункция в 6 или 10 ml литиеви или натриеви хепаринови вакутейнери (BD).Капилярни кръвни проби бяха получени с ланцет за пръсти и след това събрани в микроконтейнери с хепарин (BD).Необходими са минимум 400 µl кръв;всяка проба под това количество ще бъде отхвърлена.Други причини за отхвърляне на пробата включват масивна коагулация и/или хемолиза и невъзможност за събиране на вискозна плазма за анализ (допълнителна фигура 5).Бяха налични общо 299 проби от капилярна кръв за оценка на отговорите на антителата, от които 270 проби също бяха налични за оценка на отговорите на Т клетките.
Специфичните за SARS-CoV-2 Т-клетъчни отговори бяха оценени с помощта на теста COVID-19 Immuno-T (ImmunoServ Ltd) и извършени, както е описано по-горе14.Накратко, един венозен вакутейнер от 6 ml или 10 ml натриев хепарин (BD) беше взет от всеки участник и обработен в лабораторията в рамките на 12 часа след вземането на кръв.Въпреки че повечето проби бяха обработени в рамките на 24 часа, една 400–600 μl хепаринизирана капилярна кръв от микрокървене (BD) беше събрана в рамките на 48 часа след вземане на проба от пръста.Венозни и/или капилярни кръвни проби бяха стимулирани с отделни пептидни пулове, специфични за SARS-CoV-2 (вариант от див тип), както беше описано по-горе14.Тази пептидна библиотека съдържа 420 15-мерни последователности с 11 припокриващи се аминокиселини, обхващащи целия шипов протеин (S1 и S2) (S; NCBI протеин: QHD43416 1), нуклеокапсиден фосфопротеин (NP; NCBI протеин: QHD43423 2) и мембранен гликопротеин (M ; NCBI протеин: QHD43419 1) кодиращи последователности (наричани "S-/NP-/M-комбинаторна пептидна библиотека").Всички пептиди бяха пречистени до> 70%, разтворени в стерилна вода и използвани при крайна концентрация от 0, 5 μg / ml на пептид.Пробите се инкубират при 37°C за 20-24 часа.След това епруветките се центрофугират при 5000 × g за 3 минути и ~150 µl плазма се събира от горната част на всяка кръвна проба.Съхранявайте плазмените проби при -20°C до един месец, преди да започнете анализи за откриване на цитокини/антитела.
IFN-γ се измерва с помощта на IFN-γ ELISA MAX Deluxe Set (BioLegend, каталожен номер 430116) и се извършва съгласно инструкциите на производителя.Веднага след добавянето на стоп разтвор (2N H2SO4), микроплаката се чете при 450 nm с помощта на BioLegend Mini ELISA четец на плаки.IFN-y се определя количествено чрез екстраполация на стандартна крива, като се използва GraphPad Prism.Стойностите под долната граница на откриване на анализа са записани като 7,8 pg/ml, стойностите над горната граница на откриване на анализа са записани като 1000 pg/ml.
Анти-SARS-CoV-2 RBD/S1/S2/N IgG антитела бяха измерени с помощта на Bio-Plex Pro Human IgG SARS-CoV-2 4-плекс панел (Bio-Rad, кат. № 12014634) и маркирани съгласно инструкции на производителя.инструкции.Проби, отчитащи стойности над границата на количествено определяне, бяха повторно анализирани при разреждане 1:1000.Средният интензитет на флуоресценция на перлите се измерва с инструмент Bio-Plex 200 (Bio-Rad).Концентрациите на антитела бяха изчислени чрез VIROTROL SARS-CoV-2 единичен контролен анализ (Bio-Rad) и преобразувани в WHO/NIBSC 20/136 международни референтни стандартни единици (BAU/mL), като се използва факторът за калибриране на производителя.
Специфичните за RBD и S1 субединица неутрализиращи антитела срещу SARS-CoV-2 див тип и делта (B.1.617) SARS-CoV-2 линии бяха измерени с помощта на Bio-Plex Pro Human SARS-CoV-2 Variant Neutralization Antibody Kit (Bio -Rad, част № 12016897), съгласно инструкциите на производителя.Измерете средния интензитет на флуоресценция на Bio-Plex 200 (Bio-Rad) и изчислете процента на инхибиране (т.е. неутрализация), като използвате следната формула:
Тестовете за инфекциозна неутрализация за SARS-CoV-2 бяха извършени, както е описано по-горе28.Накратко, 600 PFU от див тип SARS-CoV-2 бяха инкубирани с 3-кратни серийни разреждания на плазма в два екземпляра за 1 час при 37°C.След това сместа се добавя към VeroE6 клетки за 48 часа.Монослоевете се фиксират с 4% параформалдехид, пермеабилизират се с 0.5% NP-40 и се инкубират за 1 час в блокиращ буфер (PBS, съдържащ 0.1% tween и 3% обезмаслено мляко).Първично антитяло (анти-нуклеокапсид 1C7, Stratech) се добавя към блокиращ буфер за 1 час при стайна температура.След промиване се добавя вторично антитяло (анти-миши IgG-HRP, Pierce) към блокиращ буфер за 1 час.Монослоевете се промиват, проявяват се с помощта на Sigmafast OPD и се четат на четец на плаки Clariostar Omega.Ямки без вирус, без вирус, но без антитела и нормализирани серуми, показващи междинна активност, бяха включени във всеки експеримент като контроли.
Статистическият анализ беше извършен в GraphPad Prism (версия 9.4.1).Нормалността на набора от данни беше тествана с помощта на теста на Shapiro-Wilk.За всички сравнения бяха използвани непараметрични критерии.Тестът на Mann-Whitney беше използван за несдвоени проби.Всички тестове бяха двустранни с номинален праг на значимост P ≤ 0,05.
Първоначалният проучвателен анализ на набора от данни беше направен в R (версия 4.0.3).Това включва разработването на унивариантната рангова корелационна матрица на Spearman, където корелацията между две променливи е представена от размера и цвета на квадратите.Статистическата значимост между асоциациите се изчислява с помощта на rho на Spearman, където стойностите ≤0,05 се считат за значими.Сравненията, които не са статистически значими, бяха изключени от матрицата и маркирани с празни клетки.P-стойностите бяха коригирани за множество сравнения с помощта на корекцията на Holm.Използван е бинарен логистичен регресионен модел за симулиране на ефекта на променливите в набора от данни върху положителния отговор на COVID-19.IFN-γ Т клетъчните отговори и анти-RBD/S1/S2/N IgG титърни резултати бяха преобразувани във фактори, където всеки индивид беше причислен към подходящия квартил за всеки резултат.След това беше разработен първоначален изследователски модел с помощта на функцията glm в статистическия пакет (V4.0.3).Съотношенията на шансовете, получени от този оригинален модел, бяха извлечени от коефициентите на модела с помощта на функцията 'odds_plot' в пакета OddsPlotty (V1.0.2).При разработването на модела за кръстосано валидиране използвахме функцията „bestglm“ от пакета bestglm (V0.37.3), за да ограничим пристрастията на потребителите и да гарантираме, че може да се избере най-доброто подмножество от предиктори.Избраният метод беше „изчерпателен“ и информационният критерий, използван за оценка на съответствието на модела, беше AIC.Същият работен процес, описан по-горе, беше използван за получаване на съотношението на шансовете.
За повече информация относно дизайна на изследването вижте резюмето на проучването Nature, свързано с тази статия.
Писмата и исканията за материали трябва да се насочват към д-р Мартин Скар или професор Андрю Годкин.Тази статия предоставя оригиналните данни.
R кодът, използван за създаване на статистически модели, е публично достъпен без заявка29.Информация за препечатване и лицензи могат да бъдат намерени на www.nature.com/reprints.
Munro, APS и др.Безопасност и имуногенност на седем ваксини срещу COVID-19 като трета доза (бустер) след две дози ChAdOx1 nCov-19 или BNT162b2 (COV-BOOST) в Обединеното кралство: фаза 2, заслепено, многоцентрово, рандомизирано, контролирано изпитване.Lancet 398, 2258–2276 (2021).
Stewart, ASV et al.Имуногенност, безопасност и реактогенност на хетероложна първична ваксинация срещу COVID-19 (Com-COV2) с използване на иРНК, вирусни вектори и протеинови адювантни ваксини в Обединеното кралство: фаза 2, единично-сляпо, рандомизирано проучване, тест за неинфериорност.Lancet 399, 36–49 (2022).
Lee, ARIB et al.Ефикасност на ваксините срещу COVID-19 при имунокомпрометирани пациенти: систематичен преглед и мета-анализ.BMJ 376, e068632 (2022).
Dejnirattisai, W. et al.Намалена неутрализация на SARS-CoV-2 микрон вариант B.1.1.529 от серум след имунизация.Lancet 399, 234–236 (2022).
Lipsich M, Krammer F, Regev-Yohai G, Lustig Y и Baliser RD Пробивна инфекция при ваксинирани срещу SARS-CoV-2 лица: измерване, причини и последствия.Национален свещеник по имунология.https://doi.org/10.1038/s41577-021-00662-4 (2021).
Levin, EG et al.Отслабен имунен хуморален отговор към ваксина BNT162b2 Covid-19 за 6 месеца.Н. инж.J. Медицина.385, e84 (2021).
Carreño, JM и др.Активност на реконвалесцентни и ваксинални серуми срещу SARS-CoV-2 Omicron.Nature 602, 682–688 (2022).
Chemaitelly, H. et al.Продължителност на защитата на катарската иРНК ваксина срещу SARS-CoV-2 подварианти Omicron BA.1 и BA.2.medrxiv https://doi.org/10.1101/2022.03.13.22272308 (2022).
Tai, MZ и др.Честотата на В-клетките на паметта намалява с пробивна инфекция на делта ваксина срещу COVID-19.Молекулярна медицина EMBO.14, e15227 (2022).
Kundu, R. et al.Кръстосано реактивните Т клетки на паметта са свързани със защитата на контактите с COVID-19 от инфекция със SARS-CoV-2.Национална комуна.13, 80 (2022).
Geurtsvan Kessel, CH и др.Отличителни SARS CoV-2 омикрон-реактивни Т-клетъчни и В-клетъчни отговори при реципиенти на ваксина срещу COVID-19.науката.Имунология.https://doi.org/10.1126/sciimmunol.abo2202 (2022).
Гао, Ю и др.Наследствените специфични за SARS-CoV-2 Т-клетки кръстосано разпознават варианти на Omicron.Народна медицина.28, 472–476 (2022).
Scarr, MJ и др.Измерването на специфични за SARS-CoV-2 Т-клетки от цяла кръв разкрива асимптоматична инфекция и имуногенност на ваксината при здрави индивиди и пациенти с рак на солидни органи Имунология https://doi.org/10.1111/imm.13433 (2021).
Тан, AT и др.Бързо измерване на шипове на SARS-CoV-2 Т клетки в цяла кръв на ваксинирани и естествено инфектирани индивиди.J. Клинична.инвестирам.https://doi.org/10.1172/JCI152379 (2021).
Tallantyre, EU et al.Отговор на ваксината срещу COVID-19 при пациенти с множествена склероза.Инсталирай.неврони.91, 89–100 (2022).
Bradley RE et al.Устойчивата инфекция с COVID-19 със синдром на Wiskott-Aldrich изчезна след терапевтична ваксинация: доклад за случай.J. Клинична.Имунология.42, 32–35 (2022).